如何选择鼠的给药途径?操作方法、剂量对比及注意事项
在实验动物研究中,不同的给药途径会影响药物的吸收、生物利用度和特定实验的适宜性,研究人员必须熟悉各种途径,才能以最佳的方式对动物进行给约,得到科学的,合理的实验结果,下面我们就来聊一聊常用鼠的给药途径。
01皮下注射(Subcutaneous Injections, SC)
皮下注射给药:是将药液注入皮下结缔组织,经毛细血管、淋巴管吸收过入血液循环的方法。在生物医学研究中,皮下注射也是一种常见的给药方式。
该技术通常用于皮肤较薄、皮下组织疏松且血管较少的部位,如颈背部、腋下或大腿内侧的皮肤。{建议常用部位是鼠两耳提起后可出现一皮肤凹陷处,在此给药可确保药物给在皮下。1
凡是易溶解、无刺激性的药物以及菌苗、疫苗、细胞等,都可以进行皮下注射。
具体操作步骤:
首先抓取固定小鼠,剃去注射部位毛发并用酒精消毒,用左手拇指与食指捏起小鼠背部皮肤,右手手持注射器,针头斜面朝上与皮肤呈30-45"角刺入帐跻状皮肤,刺入后针头轻轻左右摆动(易摆动说明已刺入皮下),再轻轻抽吸,如无回血,可缓慢地将药物注入皮下(推药过程中能明显观察到注射部位鼓起一小包,小包一定时间可消失),注射完拔出针头后用无菌棉签压住进针部位片刻以免药物外漏。
注射剂量:大鼠一股小于1ml/100g,小鼠一般为
0.1~0.3ml/10g。总药量;小盘不超过0.5ml,大鼠不超过1ml。
注意事项:
1.正确抓取功物,动物必须受到足够宽松的抓握,这样皮肤才能活动起来。2.如果动物要接受多次皮下注射,可交替注射部位。
02皮内注射(Intradermal Injections,ID)
皮内注射给药;是将药液注入皮肤的表皮和真皮之间,用于观察皮肤血管的通透性变化或皮内反应,接种、过数实验等。皮内注射吸收较慢。皮内注射一般选用背部寄柱两侧的皮肤。
具体操作步骤;
固定小鼠后,将注射部位毛发剃去,局部常规消毒,左手拇指和食指按住皮肤使之绷紧,在两指之间进行针头穿刺,针头斜面朝上与皮肤呈大约30°角刺入,同时针头稍被上挑起并稍刺入,将药液注入皮内。注射后皮肤出现小丘疹状隆起并且比周围的皮肤白,且皮肤上的毛孔极为明显。如果注射时感觉比较费力:说明注射正确;如果感觉比较容易,说明已注入皮下,要拔出针头重新注射。
注射剂量:大鼠一般小于0.1ml/次,小鼠一般小于0.05ml/次。
注意事项:不要回抽注射器。
03 肌肉注射(intramuscular injection,IM)
肌肉注射一般用于有特定给药方式要求的药物,或不溶、难溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时可选择肌肉注射。注射部位一般选拼肌肉丰富、血管较少的臀部。大小鼠后肢处肌肉较少,故一股不进行肌肉注射。
具体操作步骤:
肌肉注射一般在动物麻醉后进行,或者由两个人操作,一人同定动物,另一人执行注射。一般注射部位为大腿内侧或外侧肌肉。酒精消毒注射部位后,左手抓住后肢,右手持针插入肌肉,试着回拍针筒,如有血液或液体回流,表示不适当,需重新插入。确定针头插入肌肉后,慢慢将药剂推入,推入的速度应避免太快,以免组织损伤。
注射剂量:大鼠单次注射量一般不要超过0.3ml小鼠单次注射量一般不要超过0.1ml。
注意事项:
1、正确抓取动物,确保动物的一个后战是自由的,稳定地注射。2、针应该垂直于动物的皮肤插入。3、不要注射到后面的肌肉群,因为可能会损伤坐骨神经。4、如果小显要接受多次肌肉注射,要双腿交替注射。
皮下注射和肌肉注射,药物主要是经皮下和肌肉中的毛细血管吸收:吸收没有静脉注射完全,但皮下注射和肌肉注射也成功的避开了胃肠道和肝脏首过代谢。
04 尾静脉注射(Intravenous Injections, IV)
静脉注射:一种用注射器将少量或单一种类药品注射到静脉,使药物直接进入血液循环的一种方式。静脉注射是效率最高的给药方式,不需要溶剂的吸收,不存在收过代谢,生物利用率最高。可以通过一次性注射或滴注的方式注射入血管内。
大小鼠的导静脉共有3条,其中民部左右两侧各有一条,背侧有一条。因为左右两侧静脉角质层较薄且易固定,所以常为注射所用。
具体操作步骤:
操作时将小鼠用专门的保定器保定,使其属部充分暴露,尾部用45-50℃的温水浸润半分钟或用酒精擦拭使血管扩张,并使表皮角质软化,用左手拇指、食指和无名指捏住并从下面托起垦巴,用无名指和小指夹住尾巴的末梢,右手持注射器使针头与静脉平行(小于30°),距鼠尾尖1/4处(约距尾尖2-3厘米)处进计,此处皮薄易于刺入,先缓注少量药液,如无阻力,无白色皮丘出现,表示针头已进入静脉,可正式注入药物。
若推药无阻力且血管整条会立即由红变白,推完药则血管又恢复红色,用干棉球按压止血则尾静脉注射完成。如需反复注射,应从尾部未端开始,逐渐向屈根方向移动。
注射剂量:小鼠单次注射量一般为
0.1~0.2ml/10g。大鼠单次注射量一般为
0.3-0.5ml/100go注意事项:
(1)如阻力较大,或注射时有隆起,则说明注射到了皮下。此时应迅速抽出注射器,轻轻在原注射位点稍上的位置再次注射。
(2)静脉血管充盈是保证注射成功率的平要因素。一般使用酒精在小鼠尾静脉部位来回擦拭,由于小鼠虽静脉很浅静脉很浅,插入深度不宜超过斜面太多。
(3)注射开始尽可能靠近尾尖(远心端),如果第一次注射失败,这样还有未受损静脉用来再次注射。
05腹腔注射(Intraperitoneal Injections, IP)
腹腔注射;将药物注入动物胃肠道浆膜以外、腹膜以内的注射方式。腹腔注射作为常用给药方式的一种,方便易行,吸收快速,一股用于小鼠麻醉、药物诱导等实验,一般用于不适宜或经胃肠道吸收效率较低的给药,井且还能对幼鼠进行诱导。
经腹腔给药,药物吸收速度较静脉注射慢,但是这种给药方式可以注射的药物体积要大于静脉注射,对于个体较小的实验动物给药具有重要意义。
具体操作步骤;
腹腔注射时右手持注射器,左手的小指和无名指抓住小鼠的尾巴,另外三个手指抓住小鼠的颈部,翻转小鼠使小鼠的头部向下,腹部向上。这样由于重力作用,腹腔中的器官就会自然倒向胸部,防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
右手将注射针头于左下腹部刺入皮下,以45度角穿过腹肌(进针不能太深,感到明显的穿透感即可,以防刺入脏器;进针后注意回抽,抽回较吃力且仅空气被回吸则说明过针成功),因定针头,缓缓注入药液。进针的动作要轻柔,防止刺伤腹部器官。
注射完后不能立马抽出针头,要将针头在腹腔内多停留一段时间,堵住伤口阻止药物外流,让药物随着脏器蠕动被转移。
注射剂量:大鼠单次注射量一般为
1.0~2.0ml/100g。小鼠单次注射量一般为
0.1-0.2ml/10g。
注意事项:
1、针头刺破腹肌后会有落空感,此时针头已进入腹腔,应停止进针以免针头刺入过深损伤内脏。
2、为避免伤及内脏,应使动物处于头低位,使内脏移向上腹。
3、对于体重较小的小鼠,腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离,最好是从腹部一侧进针,穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔,注射完药物后,缓缓拔出针头,并轻微旋转针头,防止漏液。
小鼠尾静脉注射对初学者来说,可能有一定难度,但注射是否成功容易判断,不会对实验结果造成影响。而腹腔注射虽然看似简单,但如果操作不当,很容易造成注射失败,并不被发现,直接影响到实验结果。
06经口给药法
对于实验动物来说,常用的口服给药方式包括直接口服(将药物混入水或饲料中,动物自己觅食)和被动口服给药(灌霄)。
口服给药是将药物混于饲料或溶于饮用水中,让动物自由摄取。此方法优点是操作简单方使,缺点是药物剂量不能保证准确:因动物个体差异,采食量有差异,药量难以精准控制,不能客观反应实验结果,故此法应用较少。
灌胃给药是指借助器械(灌霄针)将药物溶液或混悬液直接灌入动物胃内。此法操作简便,可以实现精准给药,灵活控制给药剂量,也能很好的模拟临床中药物经口服后的一些列体内作用,因此成为动物给药众多方法中被大家广泛认可的技术之一,作为一个科研工作者必须熟练掌握
灌青给药看似简单,实则大有学问,操作如果手法不当很容易导致内容物进入气道或伤到食道,进而引起动物死亡,导致实验失败。接下来一起来看看灌胃给药注射技巧:
操作步骤(以小鼠为例):
(1)灌胃前将动物禁食4~8小时,避免太多胃内容物阻碍灌胃注射以及影响药物吸收速率,同时也可避免动物灌青后呕吐。
(2)选用合适型号的灌胃针与合适量程的注射器,组合成灌胃器,并吸取一定的药液,放在一关备用。
灌胃针的尖端有一个中空的金属球,目的是防止针头刺入气管或划伤消化道。所需的长度应需要从举起动物的联角开始测量,灌胃针的球头应达到动物最后一根肋骨。以避免插入胃管时插入过深造成动物冒的伤害,或是插入过浅使灌注物无法达到胃部。
(3)将小鼠固定成垂直体位,使其头、颈、身体成一条直线。具体方法如下:右手拉住小鼠尾巴,左手的拇指、食指和中指揪住小园背部及颈部皮肤将动物固定,另外小指和无名压住小鼠的尾巴即可。(注意要固定牢不能让其乱动,且对颈部皮肤不宜拉得太紧,以免使其发生窒息。若抓取不得当,切记要放开重抓,以免后续操作出问题。)
(4)抓取好小鼠后即可灌青。具体方法如下:右手持注射器将灌霄针沿嘴角轻轻插入口中,用灌岗针压住舌头,抵住上颚,使口腔和食道成一条直线,再沿咽后壁徐徐插入食管(针插入时应无阻力,会有一种刺空感),若感到阻力或动物挣扎时,应拔出重插,以免损伤或穿破食管以及误入气管。
刺激小鼠引起吞咽动作,顺势迅速将灌胃计插入约3-4cm,将药液注入。如动物无呼吸异常,无挣扎呕吐,则证明灌胃针已进入胃内。
(5)灌肯结束后轻柔的拔出灌胃针,观察是否有漏液并关注小鼠健康状态。如无呼吸异常,可确定灌胃成功。
操作要点与注意事项:
由于小鼠的气管靠近食管,在灌胃过程中需要注意避免药物进入气管导致小鼠窒息死亡。只能够对被抓取的、清醒的动物进行灌胃,麻醉或镇静会增加误吸的风险(物质无意中进入肺部)
小丑的固定非常重要,尽量保持动物的舒适度以及实验人员操作的便利性,以避免在洲胃过程中动物因为姿势不适而挣扎,造成灌胃失败。
在灌注过程中功物,如出现呛口、呕吐或强烈挣扎等现象,应立即停止灌注,拔出灌青针重新进行灌霄。推注过程要缓慢均匀,如注射量较大,应当采取间歌注射,即注射一定量后停顿一下再继续。
灌胃针不可插入过深,一般插入小鼠34cm,大鼠4-6cm后即可注入药物;
灌胃体积常为0,1-0,2ml/10g,过度的灌胃量易引起小日不适甚至死亡。常用灌胃量:小阻0.1
0.8ml,大鼠1-3ml。07其它途径给药方法
下面介绍几种特殊给药方式,一般用于有特殊要求的研究中。
(一)口鼻给药
在造哮喘与肺动脉高压等模型时常用到鼻滴作为给药途径。具体操作步骤:
所需工具:移液抢及枪头,药品,沾有乙键的棉球,50ml离心管(1)首先用移液枪吸取药物待用。(滴身的药液尽量浓缩,每次消息量建议在200ul以内)(2)将小鼠放入有乙醚棉球的离心管中,待小鼠失去自主活动后,将小鼠拿出左手抓取固定小鼠,右手持移液器将药物慢慢滴到小鼠鼻孔上,待小鼠吸入鼻腔(注意药剂会消失在鼻孔里),每次药液应无菌且量不多。(3)重复上述操作,直到所需的量完成为止。(4)滴鼻完成后,将小鼠保持滴鼻的姿势一段时间,防止药液流出影响实验数据可靠性。
注意事项:
·滴鼻时应绿逮滴下,一定要等到小鼠将前一滴药液吸入后,再开始滴往下一滴;
·滴注时需做到少量多次,速度太快易引起小鼠死亡;
,药液需要无菌,避免引起肺部感染;
(二)皮肤给药
皮肤给药主要用于研究药物或毒物经过皮肤的吸收效果和对皮肤的局部作用、致敏作用和光感作用等:
大小鼠主要采用浸尾的方式进行皮肤给药,以此来定性地判断药物经皮吸收作用。具体操作:将动物放入固定器内(如大小鼠的尾静脉固定器),露出民巴,将鼠尾浸入药液(可在特定通风橱内操作),一定时间后观察其药物反应。对于有挥发性的有毒物质要设法将鼠尾放于密封容器内,并置于通风构内,同时实验人员应佩戴防毒面罩,做好防护。
兔和豚鼠常采用背部一定面积的皮肤脱毛后,将一定的药液涂在皮肤上,药液经皮肤吸收。
(三)脑内给药
脑内给药应用较少,一般用于特定药物的特定给药方式及一些特殊实验(如帕金森造模)。成年大小鼠颅骨较硬,注射前需进行颅脑开商手术,常使用脑定位注射仪进行注射;幼鼠可用言刺法进行注射,大致操作是先将动物麻醉,用酒精对动物颅部进行擦拭消毒,左手对动物头部进行筒单固定,在两耳连线和两眼前缘连线的中问部位确定位置,右手手持注射器,直接中部位置垂直刺入硬脑膜下,进针大约2-3mm,缓慢注入药物即可,注射完毕酒精消毒局部。
这么多给药方法,在实际研究中,我们该如何选择呢?
(1)多卷照所开发药物拟采用的临床给药方式并结合适应症(如静脉和腹腔注射的吸收速度快,适合急症处理)来选择。从新药研发角度来说,能口服最好,因为口服给药是最方便、经济、安全的方式。
(2)根据实验目的选择;如你要研究口服生物利用度就选用动物灌胃给约,要研究腹腔给药生物利用度就采用腹腔给药方式。
(3)主要考虑药物的溶解性,稳定性及毒性等。
①口服给药;适用的药物剂型比较多,只要保证药物是均匀且稳定的就可以。如功物体内胃肠道是有一定pH值的,有的区段酸性会很强,如果该药物具有体内pH不稳定性就应该选择口服以外的给药方式。如果发现药物口服具有肠毒性时,就可以考虑选择静脉等其他给药方式。
②静脉给药:对药物剂型要求比较高,需完全溶解的溶液或者药物颗粒比红细胞小的多的体系,因此不溶的剂型是不能考虑静脉注射的。
①脑内给药和皮下注射:脑内和皮下给药量很小,需结合给药量。如同样的给药剂量下,脑内注射和皮下注射配制的药物浓度就要高一些,需要考虑到药物溶解性是否满足要求。
(4)技术难度,如长周期的静脉注射给药难以操作时,可考虑选择生物利用度比静脉差一点又好操作的腹腔给药来进行实验。
不同给药方式之间剂量换算估值如下表:
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